Pruebas moleculares

PRUEBAS MOLECULARES PARA EL INFARTO AGUDO DE MIOCARDIO

TÉCNICAS DE SECUENCIACIÓN

El secuenciador automático ABI Prism 377 es un sistema de electroforesis y detección de fluorescencia, controlado por microprocesador, que se utiliza para secuencia automática o análisis de fragmentos de ADN empleando el método de secuenciación automática en geles desnaturalizantes. Unos de los genes que han sido estudiados por esta técnica molecular, ha sido; "gen codificante de leucotrienos. Para su genotipado se obtiene y purifica el ADN genómico de sangre total con anticuagulante EDTA  de cada paciente. La concentración de ADN se determina por espectrofotometría ultravioleta. A continuación se utilizan las sondas TaqMan para la reconstrucción del gen. Se utiliza el SNPS (single nucleotide polymorphisms) que será escaneado por el secuenciador. Los datos del genotipo se analizarán usando el programa PHASE v2.0.2.

Mediante este secuenciador podemos realizar estudios sobre los siguientes genes relacionados con cardiopatéa isquémica:

• ·        Gen codificante de leucotrienos (ALOX5AP ).
• ·        Gen codificante de β-miosina (MYH7).
• ·        Gen codificante de troponina T2 (TNNT2).
• ·        Gen codificante de troponina I tipo 3 (TNNI3).
• ·        Gen codificante del enzima convertidor de la angiotensina: ACE-17q.
• ·        Gen codificante del receptor α2-adrenérgico.

 

http://www2.iib.uam.es/seq/tecnicas/abi377.htm

Referencia:

1. Elosua R, Sayols S. Genética de la Cardiopatía Isquémica: del conocimiento actual a las implicaciones clínicas. Revista Española de Crdiología [Internet]. 2017[citado el 26 de julio del 2020].vol.70. num.9.: Disponible en: https://www.revespcardiol.org/es-genetica-cardiopatia-isquemica-del-conocimiento-articulo-S0300893217302087

Prueba de PCR en el Infarto Agudo de Miocardio

Prueba de Reacción en cadena de Polimerasa (PCR), en el Infarto Agudo de Miocardio

T: Polimorfismos génicos RRM1, RRM2 Y ERCC2 en la enfermedad arterial coronaria

O: Analizar la relación de los polimorfismos génicos y la vía de la reparación por escisión de nucleótidos en la aterosclerosis

M: Obtención de muestras de sangre periférica en tubos vacutainer con EDTA

AN: ADN genómico

G: RRM1 (rs12806698)       44,321 pb
     RRM2 (rs6859180)         10,722 pb
     ERCC2 (rs13181)           21,982 pb

PCR: PCR en tiempo real

Pasos: En primera instancia: mantenimiento a 95°C por 10 minutos. En seguida los 40 ciclos de:
            Desnaturalización: 92 °C...........15s
            Hibridación: 55°C ............60s
            Extención: 60°C (recomendado por el proveedor)...........60s

V: EFO runVIEW (electroforesis en tiempo real)

Referencia: 

Murat E, Isbir S, Gormus S, et al. RRM1, RRM2 and ERCC2 Gene Polymorphisms in Coronary Artery Disease. Rev. In vivo [Internet]. 2016 [citado 18 julio 2020]; 30(5):611-615. Disponible en: http://iv.iiarjournals.org/content/30/5/611.full#sec-3 

Alteraciones en la Epigenética

Alteraciones en la Epigenética del Infarto Agudo de Miocardio

Los microRNA (miRNA) son biomarcadores que constituyen una densa red reguladora de la expresión génica con múltiples efectos cooperativos sobre un gran número de genes: lo que permite controlar diversas rutas metabólicas. Varios estudios han analizado la asociación de los miRNA con enfermedad coronaria ( estudio a, estudio b). Los miRNA actúan a nivel post-transcripcional mediante la degradación del RNAm o inhibición en la traducción. MicroRNA relacionados con predisposición a cardiopatía isquémica e infarto, encontramos: miR-1, miR-133a, miR-208b, miR-122, miR-21, miR-146, miR-499 los más representativos. Por ahora, la comunidad científica tiene grandes expectativas en la utilización clínica de los microRNA como herramienta diagnósticas y pronosticas de la enfermedad cardiovascular.

Referencia: 

Gonzalo D, Iglesias E, Llorente V. Biomarcadores Epigenéticos y Enfermedad Cardiovascular: los microARN circulantes. Revista Española de Cardiología [Internet]. 2017 [citado 10 julio 2020]; 70(9):763-769. Disponible en: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0300893217301586

 

Alteraciones de la Traducción

Alteraciones de la Traducción en el Infarto Agudo de Miocardio

Mediante estudios de ligamiento se demostró la presencia de un haplotipo en el gen ALOX5AP que codifica una proteína activadora de la lipooxigenasa-5 (enzima implicada en la biosíntesis de mediadores lipídicos de la inflamación, por ejemplo: leucotrienos. Los cuales exhiben una capacidad quimiotáctica hacia los leucocitos (neutrófilo y monocitomacrófagos) y de adherencia de estas células a la pared vascular. Asentadas estas células sobre la pared vascular se cargan de lipoproteínas de baja densidad (LDL), haciendo que la enzima 5 lipooxigenasa intensifique la oxidación de estos lípidos, aumentando de esta forma su efecto deletéreo en cuanto a promotora de ateromatosis desencadenando la expresión de aterosclerosis. Es por ello que este haplotipo conlleva a un riesgo de infarto agudo en el miocardio.

Referencia:

R. Elosua, C. Lluis, G. Lucas. Estudio del componente genético de la cardiopatía isquémica: de los estudios de ligamiento al genotipado integral del genoma. Rev. Española de Cardiología Supl [Internet].2009 [citado 04 julio, 2020]. Vol9. Disponible en: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S113135870971502X